试剂准备
- ELISA 试剂盒
- 所有试剂平衡至室温并轻柔混匀
- 标准品按说明书连续梯度稀释
实验耗材蛋蛋白系列人肿瘤类器官培养
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WORKFLOW
更多详情 ELISA 双抗体夹心法
加样与孵育
- 加样注意事项
- 加样顺序一致，单孔移液误差低于 5%
- 封板膜密封孵育，避免边缘孔蒸发
显色与终止
- 显色底物
- TMB 避光显色 10–20 min
- 加入终止液后 15 min 内读数
读数与标曲拟合
- 四参数拟合教程
- 450 nm 读数，570/620 nm 参考校正
- 标准曲线优先使用 4PL 拟合
WORKFLOW
更多详情 细胞传代培养
培养基配制
- 完全培养基组分
- 完全培养基：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
- 培养基使用前预温至 37 ℃
胰酶消化
- 消化与清洗试剂
- PBS 清洗 1–2 次后加入胰酶
- 细胞变圆脱落即用完全培养基终止
接种与培养
- 传代比例与换液节奏建议
- 常规传代比例 1:3–1:6
- 37 ℃、5% CO₂，次日检查贴壁状态
WORKFLOW
更多详情 HPLC 蛋白纯化分析
样品前处理
- 过滤与浓缩耗材
- 样品经 0.22 μm 滤膜过滤后进样
- 蛋白浓度过低时使用 10 kDa 超滤管浓缩
流动相配制
- 色谱级试剂
- 水相与有机相均需超声脱气
- 缓冲盐溶液使用 HPLC 级水配制
亲和纯化
- 纯化填料
- Ni-NTA 上样前平衡 5–10 个柱体积
- 洗脱组分分管收集并检测 A280
色谱分析与纯度评估
- C18 柱分析方法参考
- 先以低梯度斜率优化分离度
- 记录保留时间、峰面积、纯度与回收率
WORKFLOW
更多详情 SDS-PAGE 蛋白电泳
制胶
- 制胶试剂
- 按目标分子量选择 8%–15% 分离胶
- TEMED 与 APS 最后加入并立即灌胶
样品准备与上样
- 定量与 Marker
- 样品与 5× 上样缓冲液按 4:1 混合
- 95 ℃ 变性 5 min，冰上快速冷却
电泳
- 电泳电压 / 时间设置建议
- 浓缩胶 80 V，分离胶 120 V
- 溴酚蓝距胶底 1 cm 时停止电泳
染色与脱色
- 染色试剂
- 考马斯染色 30–60 min
- 脱色至背景清晰后成像
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